作者：電泳設備中電泳呈現拖尾現象，英文成為smear，就是彌散。其原因，主要從以下兩個方面考慮：1、PCR產品本身原因：往往由于酶量過多或酶的質 來源： 發布時間：2020-10-13 12:43:47 瀏覽量：
電泳設備中電泳呈現拖尾現象，英文成為smear，就是彌散。其原因，主要從以下兩個方面考慮：
1、PCR產品本身原因：
往往由于酶量過多或酶的質量差，dNTP濃度過高，Mg2+濃度過高，
退火溫度過低，循環次數過多，而造成PCR的非特異性產品過多。
對策：
①削減Taq酶的量，或調換另一來源的酶。
②削減dNTP的濃度。
③恰當下降Mg2+濃度。
④添加模板量，削減引物的用量，削減循環次數，提高退火溫度。
2、電泳體系的問題：
（1）電泳緩沖液TAE或許TBE的污染，建議替換緩沖液。
（2）上樣時樣品漂了，建議添加上樣緩沖液的用量，以及當心加樣。
（3）電壓太高。
（4）恰當把你的膠的濃度加大。（根據你的片斷巨細而定）
（5）調查你的marker是否也存在拖尾現象，作為對照。
PCR拖尾及假陽性的原因及對策
拖尾現象：產品在凝膠上呈Smear狀態。
原因：
1.模板不純
2.Buffer不合適
3.退火溫度偏低
4.酶量過多
5.dNTP、Mg2+濃度偏高
6.循環次數過多
對策：
1.純化模板
2.替換Buffer
3.恰當提高退火溫度
4.適量用酶
5.恰當下降dNTP和鎂離子的濃度
6.削減循環次數
假陽性
現象：空白對照呈現意圖擴增產品
原因：
靶序列或擴增產品的穿插污染
對策：
1.操作時應當心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺起離心管外；
2.除酶及不能耐高溫的物質外，一切試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及加樣槍頭號均應一次性運用。
